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要毕业，实验收尾阶段HUVEC8000细胞出幺蛾子。哪位大神有呀？急!只剩定量PCR了

一定要无血清培养基培养。无血清培养的目的只是适合将来临床使用或者排除其他不确定成分因子影响基础研究的判断。你可以用含10%FBSDMEM，然后使用Sciencell的MSCM进行培养:F12培养基培养好原代（0，I型胶原酶至少消化40min以上）.1%gelatin包被，效果还不错

一、原代细胞与细胞系有什么区别？根据传统定义，自组织第一次收获和接种的细胞被称为原代细胞[Freshney,R.I.(1987).CultureofAnimalCells.AManualofBasicTechnique.(NewYork,AlanR.Liss,Inc.)].这类细胞直接从组织分离，生命周期有限，经数次传代后会逐渐停止生长。原代细胞在有限的生命周期内需掌握好细胞的最大生长空间，以保持细胞群中基因型和表型的一致性。细胞系是不断生长、分化的细胞群，因其经过遗传改造，致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于医疗或科研。但实际上，经过长时间、连续的传代培养后，细胞系随着代数的增加，细胞的基因型和表型都有可能发生改变。需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群，除非细胞经过了遗传改造。二、倍增和代数有什么区别？倍增是培养物中细胞总数的翻倍，通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出，传代培养过程的次数，传代培养的目的，是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。三、接收到的冻存细胞该如何处理？收到包装箱后，立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快，以避免升温。不要将细胞储存在-80℃，这样会对细胞造成不可挽回的伤害。四、有多少经验才能开始正常人类细胞培养？推荐有经验者在无菌环境下用洁净操作台工作，如果有细胞系培养经验的话，对原代细胞的培养也是很有益处的。如果你是细胞培养的初学者或打算建立细胞培养实验室，我们会为你提供帮助。请联系我们的细胞培养专家（裕恒丰科技有限公司）。五、冻存的细胞该如何开始培养？(1)将一管细胞从液氮罐中取出，注意保护手和眼睛。(2)将冻存管快速的放入37℃水浴中，轻轻握住并旋转，直到管内物体完全融化。(3)将冻存管立即从水浴中拿出，擦干，转入无菌环境。(4)用70％的酒精冲洗冻存管，然后擦去多余酒精。(5)打开盖子，注意手指不要碰到里面的螺纹（注意，由于冻存管有负压，开盖时可能会有少量溢出，这是正常现象）。(6)用多聚赖氨酸（或参照说明书）包被培养瓶。多数细胞推荐的接种密度为每平方厘米5000个细胞。(7)盖好培养瓶的盖子，轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。(8)将培养瓶放入培养箱中（37℃，5%CO2，95%空气）(9)放入培养箱后第6-16小时更换一次培养基，以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。六、当我第一次复苏正常人类细胞时，是否需要先离心细胞以去除二甲基亚枫吗？第一次复苏正常人类冻存细胞时，我们不推荐离心去除二甲基亚枫。与残留的二甲基亚枫相比，离心过程对细胞的伤害更大，尤其是不适当的高速离心时。我们的经验是：如果二甲基亚枫的浓度很低，细胞不会受毒害。如果你将1ml细胞放入含15ml培养基的T-75培养瓶中，二甲基亚枫的浓度将小于0.67％，没有发现负面影响。实际上，如果细胞的接种密度为每平方厘米5000-10000个，二甲基亚枫的浓度很低。七、细胞培养过程中，多久更换一次培养基？这取决于细胞生长的速度。一般而言2-3天更换一次培养基，许多细胞培养实验室通常在周一，周三，周五更换培养基。注意：冻存细胞复苏后，在6-16小时内更换培养基，以去除残留的二甲基亚枫和死亡的细胞。八、我能扩增培养和再次冻存Sciencell的正常人类细胞吗？这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞，神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞，不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等，可以扩增培养和再次冻存。然而，需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。如果你想要再次冻存细胞，请亲自咨询我们的技术支持并使用ScienCell无血清细胞冻存液（SF-CFM）和特定的无血清培养基，以获得最佳冻存效果。九、我能长时间的冷冻保存ScienCell的原代细胞培养基吗？我们不推荐冷冻保存培养基，高营养的培养基经过冷冻和复温后，可能导致培养基成分的不可逆降解，从而影响细胞的生长。十、培养瓶中应该加入多少体积的培养基？我们推荐的用量为：T-25培养瓶5ml，T-75培养瓶15ml，T-150培养瓶30ml。文章来源北京裕恒丰科技有限公司官方微信

本人最近在培养Sciencell的huvec，用的是corning的DMEM高糖+15%的四季青胎牛，细胞差不多是这个样子。这细胞一开始还好，传几代就每天能看到上面飘的很多死细胞，也不是污染，我给好几个人看过了。两天换一次液是飘的实在多，但是huvec总不好每天换液吧？这样细胞分泌的生长因子都没了。这细胞还有就是小黑点多，这小黑点高倍下是不会动的，是不是破碎的细胞膜或者是细胞器？细胞形态对吗？我查了下ATCC上的huvec-c和我这细胞感觉形态差不多但是我看了下sciencell上的细胞形态是这个样子的我有个别的学校的朋友也养这个细胞，形态是这样的所以我觉得我的细胞形态是不是不大对劲？倒是我刚复苏的细胞形态有点接近这种，但是养一段时间又变成有棱角的那种了，下面附两张图。是我营养不够细胞长残了吗？还是其他原因呢？主要是细胞每天飘的东西多得每天都换液，还有就是这个细胞的形态问题，我现在实验都没法往下做。求帮助，谢谢大神。

我从Sciencell定了HUVEC（CAT.8000)，sciencell网站上查的说明书说需要纤维粘连蛋白包被培养瓶，可是随细胞一同到的说明书（黑白版，看似像复印的）上说要用多聚赖氨酸包被。还有人告诉我说一次性塑料培养瓶不用包被。我该选择哪种？另外配套的培养基是不是应该这样配：46.5ml单纯培养基+2.5mlFBS+0.5MLECGS+0.5MLPS?同步化我该如何配制培养基呢？附上培养基说明书，请大家帮我定夺ECM1001.pdf(62.96k)

小弟我在培养兔子静脉的血管内皮细胞，专门买了内皮细胞培养基（Sciencell公司的ECM）和ECGS是一套的。按照说明书配比FBS浓度是5%，我总觉得FBS浓度太低，所查的文献也都是用15%或10%，我也没有经验，所以很想请教一下，有没有用过这种品牌的培养基高手，或者培养内皮细胞的高手，分享一些您的经验。另外这种内皮细胞培养基用不用加大一些FBS的浓度？

1.敲降beclin1的SMMC-7721肝癌细胞2.beclin1过表达的MCF-7乳腺癌细胞本人QQ1124706868希望得到知情朋友的帮助。

板上有没有人用过这两个公司的huvec？哪个公司的huvec更像原代的huvec？谢谢

由于实验室条件不允许自己取原代的HUVEC，所以准备购买原代的，发现很多公司在网上都说是代理“美国Sciencell”的原代细胞的，而且价格，都在2600~3000元之间（5X105的细胞数），可是同时又说有“传过代的细胞，价格就便宜将近一半。想请教一下，怎么分辨买回来的是否是原代的还是已经被传过代的呢？很怕买假了，因为一共就10代左右可以使用的。难道分辨的方法只能是靠复苏时观察么？美国ScienCell的原代上时候有什么标签可以证明是原代呢~？谢谢